乌鸦糖心mv

柱式动物组织/ 细胞总蛋白抽提试剂盒

产物描述

本试剂盒创新性地采用过柱纯化的方法，能够快速、温和、高效地裂解动物组织或细胞，有效提取总蛋白，包括离心管柱和经过优化的细胞裂解液。与传统的RIPA裂解液相比，本试剂盒可以提取出更多的蛋白，避免在细胞裂解过程中由于DNA沉淀和不溶性细胞碎片导致的部分蛋白丢失。采用过柱纯化技术，最小可处理20 μL样本与裂解液混合物，最大可达500 μL。提供变性和非变性两种细胞裂解液，用户可根据后续的实验需求选取不同的裂解液。

【注】：变性裂解液可用于SDS-PAGE，Western-blotting， ELISA 分析；非变性裂解液可用于IP，Co-IP，enzyme assays 等分析。

订购信息

产物组分

运输与保存

常温运输。组分A、B在4℃保存，组分C、D常温保存，有效期12个月。【注】：研磨棒可重复使用。低温下变性裂解液会出现成分析出，缓至室温或水浴锅温浴即可。

使用方法

细胞样品

一、 样品裂解

变性液提取

1.       去除细胞培养液，用预冷的PBS 洗涤两次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果细胞密度过高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液过少会使细胞裂解不充分，影响蛋白提取的质量。

2.       用枪吹打数下，转移裂解液至离心管柱中。【注】：少量没有裂解的细胞不影响最终蛋白提取的质量。

3.       14,000 rpm 室温离心1 min。

4.       收集离心管底的裂解液即为细胞全蛋白提取液。【注】：细胞裂解液中不含蛋白酶抑制剂，需要用户加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。

非变性液提取

1.       去除细胞培养液，用预冷的 PBS 洗涤两次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果细胞密度过高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液过少会使细胞裂解不充分，影响蛋白提取的质量。

2.       用枪吹打数下，冰上放置10min后转移裂解液至离心管柱中。

3.       14,000 rpm 室温离心1 min。

4.       收集离心管底的裂解液即为细胞全蛋白提取液。【注】：细胞裂解液中不含蛋白酶抑制剂，需要用户加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。

二、悬浮细胞

变性液提取

1.         收集细胞 0.5~2x10⁷ 于1.5mL离心管中，1mL预冷的PBS洗涤两次，1,000xg 离心3min，弃上清，重复叁次。

2.         根据细胞沉淀体积加入同体积的预冷PBS重悬细胞后，根据细胞量加入对应量的变性裂解液。【注】：表中为推荐用量；PBS不可多加，只要能使细胞重悬即可。

3.         剧烈震荡15s后，转移裂解液于离心管柱中。【注】：少量没有裂解的细胞不影响最终蛋白提取的质量。                   

4.         14,000 rpm 室温离心1min（如果裂解液过于粘稠可增加离心时间）。

5.         收集离心管底的裂解液即为细胞全蛋白提取液。【注】：细胞裂解液中不含蛋白酶抑制剂，需要用户加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。

非变性液提取

1.         收集细胞 0.5~2x10⁷ 于1.5mL离心管中，1mL 预冷的 PBS 洗涤两次，1,000xg 离心 3min ，弃上清，重复叁次。

2.         根据细胞量加入对应量的非变性裂解液。【注】：表中为推荐用量。

3.         剧烈震荡15s后，冰上孵育10min。

4.         转移裂解液于离心管柱中。

5.         14,000 rpm 室温离心1min

6.         收集离心管底的裂解液即为细胞全蛋白提取液。【注】：细胞裂解液中不含蛋白酶抑制剂，需要用户加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解。

叁、组织样品

变性液提取

1.         把组织剪切成小碎片。

2.         加入适当裂解液，一般100mg 组织加入1mL 裂解液。【注】：如果裂解不充分可适当增加裂解液。

3.         用组织匀浆器或研磨棒在1.5mL离心管中研磨组织，直至充分裂解。【注】：如果是心肌，皮肤等不易研磨的组织应使用匀浆器匀浆。

4.         转移裂解液于离心管柱中。

5.         14,000 rmp 室温离心1min（如果裂解液过于粘稠可增加离心时间）。

6.         收集离心管底的裂解液即为全蛋白提取液。【注】：如果组织样品非常小，可剪切后直接加入裂解液并剧烈vortex裂解。

非变性液提取

1.         组织剪切成小碎片。

2.         加入适当裂解液，一般100mg 组织加入1ml 裂解液。【注】：如果裂解不充分可适当增加裂解液。

3.         用组织匀浆器或研磨棒研磨组织，直至充分裂解。冰上放置10min。【注】：如果是心肌，皮肤等不易研磨的组织应使用匀浆器匀浆。

4.         转移裂解液于离心管柱中。

5.         14,000 rmp 室温离心1min。

6.         收集离心管底的裂解液即为全蛋白提取液。【注】：如果组织样品非常小，可剪切后直接加入裂解液并剧烈vortex裂解。

注意事项

1.    本产物仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.    本产物不含蛋白酶抑制剂，使用中应加入蛋白酶抑制剂混合物(100×, 不含EDTA)(货号: AP02L084) 防止蛋白降解。

3.    本产物不兼容Bradford法测蛋白浓度，请使用 BCA乌鸦糖心mv试剂盒（货号： AP12L025）。

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